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如何才能正确使用色谱柱?

  色谱柱是一种基于大孔径Fused-Core技术的快速、高效型液相色谱柱。它紧密键合了二甲基丁基,封端,是一种非常稳定的反相柱,可用于分离蛋白等大分子物质。
 
  应用范围: 
  1、pH值范围宽:
 ?、賞H>8时,许多C18硅胶基质由于填料颗粒溶解,色谱柱内产生空隙,会过早地失去柱效。随着键合相覆盖率的增加,色谱柱寿命会延长。
 ?、趐H<2时,许多C18硅胶基质由于键合相的水解作用,会过早地失去柱效。使用三官能团键合相可获得较佳稳定性。
  2、高温稳定性。
 
  它的优势:
  1、更低的疏水性,适于快速分离:
  色谱柱提供与C18和C8相似的选择性,但保留更低。更短的链长和更低的疏水特性使C4成为保留和分离疏水性多肽和蛋白质的理想固定相。
  2、具有出众的峰形,高柱效和较高的灵敏度:
  以同样的高纯硅胶作为基质,色谱柱能提供良好的峰形。色谱柱提供1.9μm的粒径,以实现更快、更高效的分离。
 
  色谱柱的使用方法:
  1、新柱活化:新的色谱柱活化:采用100%甲醇1ml/min冲洗60min,再换成流动相进行平衡;如果流动相中含有缓冲盐,在换成流动相前,请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡;
  2、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
  3、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在,新柱子在使用之前需用100%的甲醇以0.5~1.0的流速平衡30min左右,进流动相,待系统基线平稳直接进样即可。做完实验再用100%的纯甲醇以0.5~1.0的流速冲洗30min左右,最后用100%的纯甲醇保存。
  4、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在,新柱在使用之前需用10%的甲醇水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右,将新柱高浓度甲醇溶液置换掉,进流动相,待系统基线平稳直接进样即可。做完实验再用10%的甲醇(色谱纯)水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右,将色谱柱中缓冲盐溶液置换掉,最后用100%的纯甲醇清洗30min,最后用纯甲醇保存色谱柱。

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